CRISPR-Cas9系统介导的大肠杆菌抗T7噬菌体基因编辑策略及抗性机制研究
张展搏 范正伟

山东省实验中学国际部，山东济南，250000；

摘要：设计靶向mcr-1基因的sgRNA，构建pCas9-sgRNA单质粒载体，结果显示，敲除株在mcr-1片段处未检测出条带，成功构建单质粒系统；黏菌素MIC从4μg/mL降至0.25μg/mL；感染T7噬菌体2h后，敲除株存活率为67.6%，显著高于对照组和阴性对照株；ompC表达量下调42%，recA表达量上调2.3倍。单质粒介导系统可高效清除mcr-1并恢复黏菌素耐药性，其抗T7噬菌体机制可能与宿主受体修饰及应激通路相关，为耐药菌治理和抗噬菌体菌株构建提供了新策略。

关键词：CRISPR-Cas9；大肠杆菌；mcr-1基因；T7噬菌体

参考文献

[1]刘智慧.多黏菌素耐药基因mcr-1的流行病学调查及不同药敏试验的方法学比较[D].福建医科大学,2021.

[2]谢雨虹,等.噬菌体治疗耐药菌肺部感染的研究进展[J].海南医学,2024,35(22):3340-3344.

[3]程洲华.面向环境微生物的CRISPR基因编辑工具的功能拓展和环境应用[D].中国科学技术大学,2023.

[4]丁弈丹,等.CRISPR-Cas9基因编辑技术在肿瘤治疗中的研究进展[J].激光生物学报,2022,31(06):488-497.

[5]唐欣悦,等.伴侣动物源细菌质粒介导的黏菌素耐药机制研究进展[J].动物医学进展,2023,44(01):117-121.

[6]朱恬仪,等.CRISPR/Cas9介导的adeG基因敲除大肠杆菌细菌模型的建立[J].生物技术通报,2024,40(02):55-64.

[7]马月龙,等.外膜蛋白ompC过表达提高大肠杆菌对庆大霉素敏感性研究[J].福建农业科技,2022,53(12):21-25.

[8]黄雁,等.嗜水气单胞菌RecA和Gap-2作为内参蛋白的评价[J].大连工业大学学报,2021,40(06):391-395.